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當前位置:首頁技術文章haemtech HCAPC-0080說明書

haemtech HCAPC-0080說明書

更新時間:2018-11-09點擊次數:1784

Haematologic Technologies,Inc。(HTI/haemtech)是一家ISO 9001:2015注冊公司,是一家專業從事體外研究用高質量血漿蛋白分離和表征的主要制造商。HTI的重點是凝血級聯中涉及的蛋白質,以及骨代謝的調節。HTI產品系列包括超過150種高度純化和充分表征的蛋白質,包括酶原,酶,輔因子和抑制劑,以及單克隆和多克隆抗體的互補系列。還可提供因子缺乏的等離子體和定制的血液采集管,用于臨床研究。提供的服務包括定制蛋白質純化,蛋白質修飾,化驗開發,合同制造和合同研究。

 

haemtech Haematologic Technologies,Inc。(HTI/haemtech)是一家ISO 9001:2015注冊公司,是一家專業從事體外研究用高質量血漿蛋白分離和表征的主要制造商。HTI的重點是凝血級聯中涉及的蛋白質,以及骨代謝的調節。HTI產品系列包括超過150種高度純化和充分表征的蛋白質,包括酶原,酶,輔因子和抑制劑,以及單克隆和多克隆抗體的互補系列。還可提供因子缺乏的等離子體和定制的血液采集管,用于臨床研究。提供的服務包括定制蛋白質純化,蛋白質修飾,化驗開發,合同制造和合同研究。

 

haemtech HCAPC-0080說明書

Activated Protein C

活化蛋白C.

 

活化蛋白C(APC)對因子Va的失活
表示APC對因子Va的蛋白水解失活,其中:PS =蛋白質S,PCPS =磷脂囊泡(或細胞表面)和Ca ++ =鈣離子。因子Va對形成因子Vai的失活是由APC(實心箭頭)在三個特定位點處的因子Va重鏈(94K)的蛋白水解產生的(1,2)。因子Va重鏈中這些切割位點的位置如下:(人:R306,R506和R679)和(牛:R306,R505和R662)。輔因子分子的*失活需要在精氨酸-306位置切割。通過活化蛋白C在精氨酸-306處的切割僅在膜的存在下發生,并且需要在精氨酸-505處預先切割重鏈。APC對因子Va輕鏈的蛋白水解僅發生在牛分子中,并且不需要滅活(虛線箭頭)。

活化蛋白C(APC)是一種抗凝血絲氨酸蛋白酶,來自兩條鏈,維生素K依賴性酶原,蛋白C(3-7)。α-凝血酶和血栓調節蛋白之間的復合物在蛋白C的重鏈中催化Arg-12(牛中的Arg-14)的單一切割,以產生活化的蛋白C.幾種非生理學相關的蛋白酶,例如RVV-X活化劑,胰蛋白酶和PROTAC也能夠激活蛋白C.

APC起到抗凝血劑的作用,其催化輔因子Va和VIIIa的蛋白水解失活,導致凝血酶原酶和因子Xase復合物的抑制。因子Va和VIIIa的失活是Ca 2+和磷脂依賴性的。維生素K依賴性輔因子蛋白S通過與APC形成1:1復合物(Kd = 6×10-9M)適度地增加該失活速率(8)。

有幾個因素會削弱APC的抗凝血活性。因子Xa通過競爭因子Va上的類似結合位點來保護因子Va免受APC的蛋白水解。凝血酶也被提議作為APC的調節劑通過蛋白質S的蛋白水解失活。此外,APC受循環肝素依賴性蛋白質的調節。 C抑制劑(PAI-3),循環肝素非依賴性蛋白C抑制劑,血小板衍生蛋白C抑制劑和PAI-1。據報道,在APC和兩種類型的PAI之間形成的復合物是在輸注APC或體內產生APC時觀察到的纖維蛋白溶解增加的原因。

除了我們的標準APC制劑,還可以獲得含有丹磺酰-EGEG-氯代甲基酮的活性位點封閉形式。

 

 

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HCAPC-0080 人類活性蛋白C

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尺寸

50微克

公式

50%(體積/體積)甘油/ H 2 O.

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存儲

-20℃下

純度

通過SDS-PAGE> 95%

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活動決定

顯色分析

保質期(妥善保存)

12個月

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 HCAPC-DEGR 人類活化蛋白C - DEGR(活性位點受阻)

尺寸

50微克

公式

20mM Tris,150mM NaCl,pH 7.4

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存儲

-80℃下

純度

通過SDS-PAGE> 95%

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活動決定

顯色分析

保質期(妥善保存)

12個月

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 BCAPC-1080 牛活性蛋白C

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尺寸

50微克

公式

50%(體積/體積)甘油/ H 2 O.

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存儲

-20℃下

純度

通過SDS-PAGE> 95%

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活動決定

顯色分析

保質期(妥善保存)

12個月

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 BCAPC-DEGR 牛活性蛋白C - DEGR(活性位點受阻)

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尺寸

50微克

公式

20mM Hepes,150mM NaCl,pH 7.4

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存儲

-80℃下

純度

通過SDS-PAGE> 95%

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活動決定

顯色分析

保質期(妥善保存)

12個月

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通過用凝血酶活化然后通過離子交換層析(4)從純化的蛋白C制備活化的蛋白C. APC以50%(vol / vol)甘油/ H2O供應,應儲存在-20oC。通過SDS-PAGE分析確定純度,并使用顯色底物測定法測量活性。根據APC耐藥性測定的要求,還測試了所有生產批次的APC延長正常人血漿aPTT的能力(10,11)。每批次提供該測試的結果,作為aPTT(+/- APC)比率(10nM APC)。

凝膠

Novex 4-12%Bis-Tris

加載

人aPC,每泳道1μg

緩沖

MOPS

標準

SeeBluePlus 2; 肌球蛋白(191 kDa),磷酸化酶B(97 kDa),BSA(64 kDa),谷氨酸脫氫酶(51 kDa),酒精脫氫酶(39 kDa),碳酸酐酶(28 kDa),肌紅蛋白紅(19 kDa),溶菌酶(14 kDa的)

 

本土化

等離子體

行動方式

抗凝血劑,使因子Va和VIIIa失活

分子量

56,200(人類)(5)
52,650(牛)(5)

消光系數

Ë

1%

1厘米,280納米

 

= 14.5(人類)(9)

 

 

= 13.7(牛)(9)

 

等電點

4.4-4.8(人類)(9)
4.2-4.5(牛)(9)

結構體

兩條鏈,Mr = 35,000和21,000,二硫鍵連接,NH2-末端gla結構域兩個EGF結構域

碳水化合物百分比

23%(人類)(5)
14%(牛)(5)

翻譯后修改

十一個gla殘留物(牛),九個gla殘基(人),一個β-羥基天冬氨酸

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