kainos CY-4000試劑盒說明書

FGF-23 ELISA試劑盒

檢驗(yàn)原則

FGF-23 ELISA試劑盒是兩點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒，用于測(cè)量血清中的FGF-23。兩種特異性鼠單克隆抗體與全長(zhǎng)FGF-23結(jié)合。一種抗體固定在微量滴定板孔上以進(jìn)行捕獲。另一抗體與HRP（辣根過氧化物酶）綴合以進(jìn)行檢測(cè)。

在一反應(yīng)中，將含有FGF-23的樣品與固定的抗體在微量滴定孔中孵育。樣品中的FGF-23被抗體捕獲。在該反應(yīng)結(jié)束時(shí)，將孔洗滌以除去未結(jié)合的FGF-23和其他組分。

在第二次反應(yīng)中，將這種固定化的FGF-23與HRP標(biāo)記的抗體孵育，形成“三明治”復(fù)合物：

 

抗FGF-23抗體-N末端FGF-23 C末端-HRP標(biāo)記的抗FGF-23抗體

在該反應(yīng)結(jié)束時(shí)，將孔洗滌以除去未結(jié)合的組分。

在酶反應(yīng)中，將固定在孔上的三明治復(fù)合物與底物溶液一起溫育，然后通過分光光度計(jì)微量滴定板讀數(shù)器進(jìn)行測(cè)量。與孔結(jié)合的復(fù)合物的酶促活性與樣品中FGF-23的量成正比。

通過將吸光度與FGF-23標(biāo)準(zhǔn)品的每種濃度作圖來(lái)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。從該曲線確定樣品中FGF-23的濃度。

A.產(chǎn)品信息

1）FGF-23 ELISA試劑盒中包含的測(cè)試數(shù)量/價(jià)格

注意：此價(jià)格不包括運(yùn)輸和手續(xù)費(fèi)

2）FGF-23 ELISA試劑盒規(guī)格

該試劑盒使用“三明治” ELISA和抗人FGF-23小鼠單克隆抗體來(lái)測(cè)量血清FGF-23的水平。該試劑盒具有高靈敏度，低檢測(cè)限為3 pg / mL，定量范圍為3-800 pg / mL。

包裝尺寸

C.使用注意事項(xiàng)

1）測(cè)試樣品的儲(chǔ)存條件是什么？

使用新鮮的血清樣品。如果您不能立即測(cè)試樣品，請(qǐng)將其保存在-70°C以下。避免解凍/重新凍結(jié)周期。

在我們的實(shí)驗(yàn)室測(cè)試中，在冰箱中放置13天后，給定樣品的活性降至86.6％。樣品可以在-80°C下保持穩(wěn)定約三年，但在-20°C下不能保證穩(wěn)定性。

我們已經(jīng)確認(rèn)多六個(gè)融化/重新凍結(jié)周期可能不會(huì)影響活性，但是我們建議小批量冷凍樣品以大程度地減少融化/重新凍結(jié)周期。

2）我可以使用血漿樣品嗎？

雖然可以使用FGF-23 ELISA試劑盒測(cè)試血漿和血清，但我們建議使用血清。

3）我可以使用試劑盒測(cè)試動(dòng)物樣本嗎？

FGF-23 ELISA試劑盒可用于測(cè)量小鼠，大鼠或猴子的血液FGF-23水平。

4）試劑盒中是否包含任何基于汞的防腐劑？

FGF-23 ELISA試劑盒不使用硫柳汞等基于汞的防腐劑。標(biāo)準(zhǔn)溶液，稀釋溶液，酶標(biāo)記的抗體溶液和濃縮洗滌溶液均使用Kathon™CG作為防腐劑。

5）操作注意事項(xiàng)

必須為每次測(cè)試準(zhǔn)備校準(zhǔn)曲線。
如果測(cè)試了多個(gè)樣品，則反應(yīng)時(shí)間必須保持一致。

一級(jí)反應(yīng)必須在攪拌板的同時(shí)進(jìn)行。攪拌前應(yīng)將板密封。

在洗滌過程中必須遵守以下預(yù)防措施：

請(qǐng)勿在板上放置洗滌液。

一旦從孔中充分去除了清洗溶液，請(qǐng)立即進(jìn)行下一步。

試劑

1. 1）FGF-23抗體包被的微孔板（FGF-23微孔板）
   　 96孔微孔板（12條，每條8孔）被FGF-23鼠單克隆抗體包被。

1. 2）HRP標(biāo)記的FGF-23抗體（FGF-23結(jié)合物）
   　 12 mL鼠抗辣根過氧化物酶結(jié)合的FGF-23單克隆抗體，帶有防腐劑。
   　 該試劑應(yīng)在2-10℃下保存并避光。

1. 3）FGF-23標(biāo)準(zhǔn)品（Std1?Std7）
   　 12 mL（Std1）和0.5 mL（Std2?Std7）緩沖的FGF-23含防腐劑。
   　 7瓶FGF-23在具有防腐劑的緩沖堿中。

1. 4）分析稀釋劑（Assay Diluent）
   　 12 mL緩沖液。

1. 5）顯色劑（底物）
   　 12 mL的過氧化氫尿素四甲基聯(lián)苯胺TMBZ。

1. 6）FGF-23洗滌緩沖液（10倍濃縮液）
   　 53 mL含防腐劑的緩沖表面活性劑10倍濃縮液。
   　 使用前，用去離子水將內(nèi)容物稀釋至10倍并充分混合。

1. 7）終止溶液（停止溶液）
   　 12 mL 0.5 mol / L硫酸。

1. 8）
   　 套件中包括三個(gè)平板封口機(jī)。

＊這些試劑應(yīng)在2－10℃黑暗條件下保存。
　使用前，將所有試劑置于室溫下。

測(cè)定方法

1. 1）在所有要使用的孔中加入50μL分析稀釋劑。

1. 2）在每個(gè)孔中加入50μLFGF-23標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，并用板密封劑覆蓋板。

1. 3）在平板混合器上于室溫下孵育平板120分鐘。

1. 4）拆下平板封口機(jī)。
   　 除去反應(yīng)溶液后，向每個(gè)孔中加入300μL洗滌緩沖液，然后丟棄洗滌緩沖液。
   　 重復(fù)此過程4次。輕拍紙巾或類似吸收材料上的孔板，以除去孔中殘留的水滴。

1. 　 [注1]
   　 為避免在加入洗滌緩沖液時(shí)孔變干，請(qǐng)使用多通道移液器或類似設(shè)備快速工作。

1. 　 [注2]
   　 確保移液器吸頭不會(huì)劃傷孔底部，以嘗試從孔中除去溶液。

1. 5）在每個(gè)孔中加入100μLFGF-23偶聯(lián)物，并用板密封劑覆蓋板。
   　 在平板混合器上于室溫下孵育平板60分鐘。

1. 6）以相同的方式重復(fù)4）。

1. 7）將100μL底物添加到每個(gè)孔中，并用板密封劑覆蓋板。
   　 在黑暗中于室溫下孵育平板30分鐘。

1. 8）拆下平板封口機(jī)。
   　 立即將100μL終止溶液添加到每個(gè)孔中。
   　 用微量滴定板讀數(shù)器在10分鐘內(nèi)讀取450 nm（第二波長(zhǎng)600-650 nm）的吸光度。

加入50μL分析稀釋液。
　　
加入50μLFGF-23標(biāo)準(zhǔn)品或樣品。
　　
在平板混合器上于室溫下孵育120分鐘。
　　
抽吸并清洗4次。
　　
加入100μLFGF-23偶聯(lián)物。
　　
在平板混合器上于室溫孵育60分鐘。
　　
抽吸并清洗4次。
　　
在每個(gè)孔中添加100μL底物。
　　
在黑暗中于室溫下孵育30分鐘。
　　
加入100μL終止溶液。
在10分鐘內(nèi)讀取吸光度。