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當前位置:首頁技術文章bellbrooklabs Transcreener cGAMP說明書

bellbrooklabs Transcreener cGAMP說明書

更新時間:2020-12-29點擊次數:3082

bellbrooklabs Transcreener cGAMP說明書

bellbrooklabs Transcreener® cGAMP cGAS

 

bellbrooklabs利用Transcreener cGAMP cGAS分析法發(fā)現cGAS抑制劑

Transcreener cGAMP cGAS分析法直接測量由環(huán)狀GMP-AMP合酶(cGAS,C6orf150、2'3'-cGAMP合酶)產生的環(huán)狀GMP-AMP  (cGAMP)。通過測量cGAMP的產量,研究人員可以有效地確定 cGAS酶的活性。該測定法提供了一個強大的工具,可以篩選整個化合物庫中的cGAS調節(jié)劑,以 幫助找到針對cGAS-STING途徑的新療法。

cGAS是STING途徑中的重要信使

真核細胞胞質溶膠中DNA的存在是感染或細胞損傷的指示,并且在I型干擾素(IFN)誘導的驅動下引發(fā)強烈的免疫反應。cGAS是細胞質中雙鏈DNA的非常靈敏的傳感器。DNA的結合激活了該酶,從而產生了*的環(huán)狀二核苷酸第二信使cGAMP,它充當STING(干擾素基因刺激劑)受體的激動劑,從而導致I型干擾素應答。

cGAS STING途徑

直接檢測cGAMP以測量cGAS酶活性

Transcreener cGAMP FP分析-了解更多信息
cGAS分析示意圖FP
 
 

Transcreener cGAMP cGAS FP檢測技術手冊(PDF)

 
cGAMP TR-FRET分析-了解更多
cGAS分析示意圖TR-FRET
 
 

應用領域

  • 測量cGAS的酶活性
  • 篩選cGAS抑制劑的復合文庫
  • 量化抑制劑效力
  • 確定抑制劑-cGAS停留時間

特征

  • 直接檢測未標記的cGAMP
  • 易于使用,同質,一步式
  • 初始速度條件下的穩(wěn)健分析Z'> 0.7
  • 遠紅色熒光讀數大程度地減少了化合物干擾
  • 一種安全的非放射性方法
  • 可用于FP或TR-FRET讀數

易于使用,混合閱讀,HTS就緒分析

Transcreener cGAS分析法采用易于HTS使用,混合閱讀的格式。運行您的酶反應,添加 Transcreener試劑,然后閱讀板。該測定與96、384和1536孔格式兼容。

在cGAS初始速度下檢測cGAMP

當使用標準曲線將原始數據轉換為cGAMP時,該測定法顯示線性。cGAS被雙鏈DNA激活,并需要ATP和GTP底物來生產cGAMP。

全長人cGAS滴定

cGAS酶滴定

線性響應

抑制劑篩選和執(zhí)行SAR

Transcreener cGAS分析法旨在以高通量格式篩選化合物庫。還可以使用該測定法進行隨訪SAR,從而輕松確定抑制劑的效價。

1600復合先導篩

獲取準確的劑量響應測量

cGAS抑制劑劑量反應曲線

說明了cGAS酶的DNA和底物依賴性

該測定法準確地證明了cGAS酶的特征。在GTP和ATP均存在的情況下,雙鏈DNA激活了產生cGAMP的酶。一個45個堿基對的ISD(干擾素刺激性DNA)和一個60個堿基對的HSV(單純皰疹病毒)DNA均可激活該酶。該測定法對cGAMP具有很高的親和力,即使存在其他核苷酸也可以檢測。

dsDNA激活cGAS酶

cGAS DNA滴定

對ATP和GTP的依賴

依賴于ATP和GTP的cGAS酶

出色的信號穩(wěn)定性

該測定顯示24小時以上的信號穩(wěn)定性。這樣的印版穩(wěn)定性對于大型的高通量篩選至關重要,由于大量樣品需要大量時間才能完成。

標準曲線包括ATP,GTP,dsDNA和cGAMP的滴定。在每個時間點讀取相同的板。

cGAS分析信號穩(wěn)定性
 

cGAS分析服務

有興趣推進您的程序,但不想內部進行分析嗎?我們的科學家可以提供幫助!BellBrook的科學家將利用其豐富的生物化學和酶學專業(yè)知識與您合作,并加快您的cGAS計劃。

分析開發(fā)服務

潛在客戶發(fā)現服務包括:

  • 抑制劑篩選–識別或確認靶標的活性。
  • 抑制劑效能分析–靶標和/或相關蛋白的劑量反應。快速IC 50結果。
  • 停留時間測量–使用“跳躍稀釋”酶法測定k off。
  • 作用機理研究–動力學分析定義了抑制方式。

聯系我們以了解更多信息

請?zhí)顚懴旅娴谋砀瘛N覀儗⒀杆僮龀鲰憫允箤υ掃M展順利,并了解我們如何提供幫助。我們保持事情分散,保密和專業(yè)。

 
 

在主要的多模閱讀器上驗證了遠紅FP和TR-FRET讀數

供應商儀器
bioteklogoTriStar²SLB 942
密特拉拉斯LB 943
 
bioteklogoCytation™5
Cytation™3
Cytation™1
Synergy™H1
Synergy™2 / H4 / 4
Synergy™HTX
Synergy™Neo 2
 
BMGLABTECH徽標POLARstar ®歐米茄
FLUOSTAR ®歐米茄
PHERAstar ® FSX
PHERAstar ®加/ FS
CLARIOstar ® /加
 
MDS AT徽標分析師® GT / HT
雙子座® XPS / EM
的SpectraMax ® M2 / M2e的
的SpectraMax ® M5 /的M5e / FlexStation ® 3
的SpectraMax ®范式
 
珀金埃爾默標志的EnVision ® /的EnVision ® XCITE
 
tecanLogo無限® M1000 / M1000Pro / Safire2™
無限® M200
無限® F500
無限® F200 /超進化
Spark™10M

包含什么

 
零件筆記
cGAMP抗體對二核苷酸cGAMP具有特異性的抗體。
示蹤劑當被置換時,取決于測定形式,可以在FP或TR-FRET中讀取熒光的變化。
停止并檢測緩沖區(qū)B,10X可以用于終止酶反應以終止終點讀數的緩沖液。
三磷酸腺苷ATP可用于酶反應和標準曲線。
GTPGTP可用于酶反應和標準曲線。
cGAMPcGAMP可用于創(chuàng)建標準曲線。
干擾素刺激DNAISD是用于激活cGAS酶的45 bp寡聚體。

您將需要什么

 
零件筆記
cGAS酶您可以直接通過BellBrook Labs購買活性cGAS酶 。
酶緩沖液我們經常使用含有20mM TRIS(pH 7.5)中,5毫摩爾MgCl酶緩沖液2,0.01%的Brij-35和1%DMSO(測試化合物溶劑)。使用適合您的酶條件的緩沖液
檢測板您可以直接通過BellBrook Labs購買測定板。

 

FP-需要一個具有非粘合表面的全黑色印版。我們建議康寧384孔板,目錄 #4514。

TR-FRET-需要具有無粘合表面的全白色板。我們建議使用康寧384孔板Cat。#4513

 

Transcreener cGAMP cGAS分析試劑盒

*

 
貨號。產品描述價錢
3024-1KTranscreener cGAMP cGAS FP測定法(1,000測定法,384孔)$ 798.00
3024-10KTranscreener cGAMP cGAS FP測定法(10,000測定法,384孔)$ 4,615.00
3024-100KTranscreener cGAMP cGAS FP測定(10 X 10,000測定,384孔)$ 23,075.00
3025-1KTranscreener cGAMP cGAS TR-FRET測定(1,000測定,384孔)$ 875.00
3025-10KTranscreener cGAMP cGAS TR-FRET測定(10,000測定,384孔)$ 4,989.00
3025-100KTranscreener cGAMP cGAS TR-FRET測定(10 X 10,000測定,384孔)$ 24,950.00
 

cGAS酶訂購信息

 

 
貨號。產品描述價錢
2227重組cGAS酶,活性的,人的,全長,10 µg$ 399.00
2228重組cGAS酶,活性的,人的,全長,100 µg$ 1,398.00
 
 

cGAS篩選套件

*當以1.75μg/ mL(30 nM)使用時,包括用于各孔的足夠酶

 
貓。沒有。產品描述價錢
3024-1K-B包括Transcreener cGAS FP Assay 1K試劑盒和20 µg人類cGAS酶$ 1,275.00
3024-10K-B包括Transcreener cGAS FP Assay 10K試劑盒和200 µg人類cGAS酶$ 6,670.00
3025-1K-B包括Transcreener cGAS TR-FRET Assay 1K試劑盒和20 µg人類cGAS酶$ 1,345.00
3025-10K-B包括Transcreener cGAS TR-FRET Assay 10K試劑盒和200 µg人類cGAS酶$ 6,995.00
 

FP檢測板

 

貨號。產品描述價錢
2233康寧96孔黑色檢測板(#3686),3片裝(200+檢測)$ 40.00
2229康寧384孔黑色檢測板(#4514),3包(1,000多種檢測)$ 45.00
2230康寧384孔黑色檢測板(#4514),30包(10,000+檢測)$ 400.00

 

TR-FRET檢測板


貨號。產品描述價錢
2234康寧96孔白色檢測板(#3642),3包(200多種檢測)$ 40.00
2231康寧384孔白色檢測板(#4513),3包(1,000多種檢測)$ 50.00
2232康寧384孔白色檢測板(#4513),30包(10,000+檢測)$ 450.00 

 

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