預(yù)涂層 96 孔微孔板

標(biāo)準(zhǔn)

標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液

洗滌緩沖液

檢測(cè)試劑A

檢測(cè)試劑B

稀釋劑 A

稀釋劑 B

TMB基板

停止解決方案

封板機(jī)

37°C 培養(yǎng)箱

多通道和單通道移液器和無菌移液器吸頭

噴瓶或自動(dòng)微孔板清洗機(jī)

1.5 毫升試管

蒸餾水

吸水濾紙

100 毫升和 1 升量筒

酶標(biāo)儀（波長(zhǎng)：450 nm）

ELISA 搖床

血清：樣品應(yīng)收集到血清分離管中。將試管垂直放置在 4°C 或室溫下長(zhǎng)達(dá) 60 分鐘，使血清凝固。以大約 1000 × g 離心 20 分鐘。立即分析血清或分裝并儲(chǔ)存在 -20°C 或 -80°C。

血漿：使用肝素或 EDTA 作為抗凝劑收集血漿。在收集后 30 分鐘內(nèi)以 1000 × g 離心 15 分鐘。立即測(cè)定或分裝并儲(chǔ)存在 -20°C 或 -80°C。避免溶血和高膽固醇樣本。

組織勻漿：組織勻漿的制備將根據(jù)組織類型而有所不同——這只是一個(gè)例子。用冰冷的 PBS 沖洗組織以去除多余的血液。均質(zhì)化前稱重。在 PBS 中用冰上的組織勻漿器將組織切碎并勻漿，并對(duì)細(xì)胞懸浮液進(jìn)行超聲處理。將勻漿以 5000 × g 離心 5 分鐘并收集上清液。立即測(cè)定或分裝并儲(chǔ)存在 -20°C。

1) 標(biāo)準(zhǔn)品：用推薦體積的標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液配制標(biāo)準(zhǔn)品，制成標(biāo)準(zhǔn)溶液。然后按照協(xié)議中的說明，使用標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行系列稀釋。

2) 洗滌緩沖液：按照方案中的說明，用蒸餾水稀釋濃縮的洗滌緩沖液。

3) 檢測(cè)試劑制備：計(jì)算所需工作溶液的總體積。分別用稀釋劑 A 和稀釋劑 B 以 1:100 稀釋檢測(cè)試劑 A 和檢測(cè)試劑 B。

1) 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)、測(cè)試樣品和對(duì)照孔。

2) 將 100 µl 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品分裝到標(biāo)準(zhǔn)孔中。

3) 將 100 µl 標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液分裝到對(duì)照（零）孔中。

4) 將 100 µl 稀釋樣品分裝到樣品孔中。在 37 °C 下孵育 1 小時(shí)。

5) 將 100 µl 檢測(cè)試劑 A 分裝到每個(gè)孔中。在 37 °C 下孵育 1 小時(shí)。

6) 洗滌 3 次。

7) 將 100 µl 檢測(cè)試劑 B 分裝到每個(gè)孔中。在 37°C 下孵育 90 分鐘。

8)洗滌5次。

9) 將 90 µl TMB Substrate 分裝到每個(gè)孔中。在 37°C 下孵育 10-20 分鐘。

10) 分裝 50 µl 終止液。

11) 在 450 nm 處測(cè)量 OD。