arthusbio甲硫氨酸說明書

貨號：1K00201

規(guī)格： 96 tests

Detection range 15nM - 480n

arthusbio 1K00201

甲硫氨酸是一種具有硫甲基的氨基酸，通過甲硫氨酸腺苷轉移酶（EC 2.5.1.6）與ATP一起轉化為S-腺苷甲硫氨酸（SAM）。SAM是50多種生物活性物質（如DNA、RNA、蛋白質、磷脂、激素和神經遞質等）的甲基供體。甲基在甲基轉移酶作用下從SAM轉移后，形成S-腺苷高半胱氨酸，去除腺苷后進一步代謝為同型半胱氨酸（Hcy）。同型半胱氨酸通過N5甲基四氫葉酸甲基轉移酶（EC1.1.1.68）和輔酶維生素B12催化途徑從N5甲基四氫葉酸接受甲基代謝為甲硫氨酸。這是蛋氨酸循環(huán)。

甲基化指數(shù)定義為SAM和SAH的比率。甲基化指數(shù)\是甲基化狀態(tài)和甲基化能力的更好標記。

SAM用作治療抑郁癥、肝病、關節(jié)炎和關節(jié)痛等的藥物或營養(yǎng)補充劑。

該免疫分析試劑盒用于測量可溶性樣品中SAM的水平。

測定原理

這種直接競爭ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）旨在測量樣品中S腺苷-L-甲硫氨酸（SAM）的水平。將與大分子偶聯(lián)的SAM固定在微量滴定板上。用移液管將標準品和樣品注入井中，

然后添加針對SAM的HRP結合抗體。樣品或標準品中的游離SAM分子與微滴度板表面上的固定化SAM競爭抗體的結合位點。丟棄混合溶液并清洗每個孔后，添加TMB基質溶液。基質溶液在HRP（辣根過氧化物酶）的作用下變藍，添加停止溶液（酸）后變黃。顏色與樣品（或標準品）中SAM的量成反比。使用微板分光光度計在450nm處測量剩余溶液（OD450）的光密度。樣品中SAM的水平可以通過標準品生成的標準曲線來計算。

樣品收集和儲存

1、樣品采集必須在4℃下進行。必要時，通過離心去除沉淀，并盡快測試樣品或將其儲存在-20°C或以下。避免重復凍融循環(huán)。

2.避免樣品中的NaN3，因為它會使辣根過氧化物酶（HRP）失活。

3、一些未知因素可能會對測定產生影響（基質效應）。用樣品稀釋劑稀釋樣品或用與實際樣品基質相同的基質制備標準品/樣品，這應避免或減少基質效應。

程序

1、將所有試劑重新加熱至室溫，并充分混合。取出適當數(shù)量的井，將剩余的井放回

拉鏈。密封Ziploc并將其儲存在-20°C。

2、向每個孔中加入30ul樣品稀釋劑（空白孔）、標準品和樣品。

3、制備HRP結合抗體溶液：用HRP抗體稀釋液按1:600稀釋HRP抗體，在wek內用完。

如果一周后使用，請在需要時準備。充分混合并儲存在黑暗中。

4、向每個孔中加入70ul HRP結合抗體，空白孔除外。

5、將平板置于振蕩器上，搖動一段時間，使試劑混合，然后用微孔板封閉劑密封平板。將平板在37°C下培養(yǎng)1小時。

6、小心剝離密封劑，并將剩余溶液丟棄在孔中。在每個孔中添加至少300ul洗滌液，并保持該狀態(tài)30秒，然后去除洗滌液。重復這些步驟3次以完成清洗過程。或者改用自動清洗機。

7、向每個孔中添加TMB基質和100ul混合基質。輕輕搖晃并密封盤子。將培養(yǎng)板在37°C下無光培養(yǎng)15分鐘。

8、在反應結束時加入50ul停止溶液。

9.在15分鐘內測量每個孔在450 nm波長下的吸光度。根據空白井設置零。

數(shù)據處理

始終通過從測試孔的吸光度中減去空白孔450 nm（OD450）處的吸光度來清除背景。

每個孔（標準或樣品）的吸收率等于AAso，A是標準孔或樣品孔的平均吸光度，Aso是So標準孔的平均吸光度。創(chuàng)建標準曲線：通過繪制每個標準品在y軸上的結合率與其在x軸上濃度的對數(shù)來構建標準曲線。使用二次多項式曲線對數(shù)據進行傅立葉變換（r>0.99）。樣本的SAM水平可以通過將其結合率代入標準曲線方程來計算。如果樣品已稀釋，則乘以稀釋程度。

筆記

1、使用未重新加熱的試劑和樣品或環(huán)境溫度低于20°C可能導致OD450值降低。

2、額外的干燥后洗滌可能會對結果產生負面影響，例如標準曲線和重復性較差。為了避免這種情況，請在清洗后立即執(zhí)行下一步。

3、充分混合溶液并*清洗，因為這些程序會影響分析。

4、用微板封閉劑密封板，孵育板時避光。

5、推薦標準品和樣品的重復井，建議標準曲線傅里葉變換采用二次多項式（r>0.99）。這個

質控瓶的檢測濃度應在檢測范圍內。

6、由于基質效應，樣品孔的吸光度可能高于S0標準孔的吸光度。在這種情況下，將樣品稀釋至少十倍。如果在10倍稀釋后無法檢測SAM水平，則使用與待測量樣品相同的矩陣來制備一組新的標準并再次測量。

7、濃縮洗滌液可能結晶。加熱，使鹽在稀釋前*溶解。

8、微孔板密封劑應一次性使用，以避免交叉污染。

9、基板應避光。

10、停止溶液為稀硫酸。避免直接接觸皮膚和其他物品。

存儲和有效日期

儲存條件：除HRP基質和停止溶液儲存在2-8℃外，所有其他成分和板條均可冷凍儲存。

有效期：自裝運之日起冰箱儲存約6個月。如果不打算很快使用，用戶可以將分析板，

HRP抗SAM抗體、標準品、HRP抗體和樣品稀釋液在冷凍柜中儲存更長時間或/和更好的結果。