前列腺組織消化手冊(cè)

更新時(shí)間：2016-02-16

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Worthington組織消化指南

引言

組織消化酶主要用于組織培養(yǎng)和細(xì)胞生物學(xué)研究的原代細(xì)胞的分離和收集。盡管這些消化酶已經(jīng)普遍應(yīng)用多年，但是對(duì)其組織消化和細(xì)胞收集的作用機(jī)制卻沒(méi)有全面的理解。由此導(dǎo)致的結(jié)果便是選擇一種消化方法大多是隨機(jī)選擇或基于過(guò)去的經(jīng)驗(yàn)，而不是在*理解消化原理的基礎(chǔ)上選擇的消化方案，以及如何根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)?zāi)康男拚桨敢垣@得更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

細(xì)胞分離程序的目的是zui大程度的獲得功能活性的單個(gè)細(xì)胞，而影響結(jié)果的原因有很多，包括（不限于）以下：

1、組織類型

2、物種來(lái)源

3、動(dòng)物年齡

4、遺傳改造情況（如knockouts）

5、所用的消化培養(yǎng)液

6、所用的酶

7、消化酶中的雜質(zhì)

8、所用消化酶的工作濃度

9、溫度

10、孵育時(shí)間

通常前四個(gè)原因沒(méi)辦法選擇，而剩下的原因一般由經(jīng)驗(yàn)決定以獲取zui適實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

通過(guò)查閱文獻(xiàn)來(lái)選擇*組織消化酶和zui適消化條件的研究人員通常被互相矛盾的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)搞得一頭霧水。這些巨大差異來(lái)源于組織胞外基質(zhì)的復(fù)雜而動(dòng)態(tài)的特性，以及過(guò)去常用的粗制、未提純的組織分離酶。另外，組織胞外基質(zhì)由各種蛋白、糖蛋白、脂類和糖脂組成，這些成分的組成比例在不同物種、不同組織、甚至不同發(fā)育（年齡）之間存在明顯的差異，這些因素都極大的影響了消化方案的制定。目前通常使用的粗制酶，如鏈霉蛋白酶、NF1:250、以及含有幾種其他不同濃度蛋白酶的膠原酶、以及各種多糖酶、核酶和脂酶。

本指南總結(jié)了目前常用組織消化酶的zui適消化和細(xì)胞收集知識(shí)和方法，描述了標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)步驟，以便于制定一個(gè)*的細(xì)胞分離方案，同時(shí)列舉了一些相關(guān)的參考文獻(xiàn)。

下表列出多種組織的適宜消化酶（含參考文獻(xiàn)，以組織類型和物種分類，詳見(jiàn)鏈接）

脂肪組織	腎上腺組織	骨組織	腦組織
軟骨組織	結(jié)腸組織	內(nèi)皮組織	上皮組織
眼	心臟	腸	腎
肝	肺	淋巴結(jié)	乳腺
其它組織	其他組織	肌組織	神經(jīng)組織
胰腺	腮腺	垂體	前列腺
生殖	動(dòng)物鱗片	皮膚	脾臟
干細(xì)胞	胸腺	甲狀腺/甲狀旁腺	扁桃體
腫瘤

注：使用Worthington公司消化酶的文獻(xiàn)不限于上表鏈接中所列，一般而言，Worthington公司的組織消化酶可用于大多組織類型的消化。

前列腺組織消化手冊(cè)

物種	詳細(xì)來(lái)源	細(xì)胞名稱	消化用酶	培養(yǎng)基	參考文獻(xiàn)
人類	人類	Prostatic cancer fibroblasts	Collagenase: 225 u/ml	RPMI 1640	Taylor, R., Toivanen, R., Frydenberg, M., Pedersen, J., Harewood, L., Collins, A., Maitland, N. and Risbridger, G.: Human Epithelial Basal Cells are Cells of Origin of Prostate Cancer, Independent of CD133 Status., Stem Cells 30, 1087, 2012
人類	人類	Prostatic cancer fibroblasts	Hyaluronidase: 125 u/ml	RPMI 1640
人類	人類, 52-56 歲	Prostatic stromal cells	Collagenase Type 1: 0.2%	DMEM/F-12	Le Hanh, Arnold Julia T, McFann Kimberly K, Blackman Marc R: DHT and testosterone, but not DHEA or E2, differentially modulate IGF-I, IGFBP-2, and IGFBP-3 in human prostatic stromal cells, Am J Physiol/Endo 290, E952-60, 2006
人類	人類	Prostate stromal cells	Collagenase Type 1: 0.1%	RPMI 1640	Nakashiro Koh-Ichi, Hara Shingo, Shinohara Yuji, Oyasu Miho, Kawamata Hitoshi, Shintani Satoru, Hamakawa Hiroyuki, Oyasu Ryoichi: Phenotypic switch from paracrine to autocrine role of hepatocyte growth factor in an androgen-independent human prostatic carcinoma cell line, CWR22R,Am J Pathol 165, 533-40, 2004
人類	人類, fetal	Prostatic fibroblasts	Collagenase Type 1: 0.125%	DMEM/F12	Levine AC, Liu XH, Greenberg PD, Eliashvili M, Schiff JD, Aaronson SA, Holland JF, Kirschenbaum A:Androgens induce the expression of vascular endothelial growth factor in human fetal prostatic fibroblasts, Endocrinology 139, 4672-8, 1998
小鼠	小鼠, 6-8 周	Prostate epithelial/stem	Collagenase Type 2: 0.5%	HBSS	Burger, P., Gupta, R., Xiong, X., Ontiveros, C., Salm, S., Moscali, D. and Wilson, E.: High Aldehyde Dehydrogenase Activity: A Novel Functional Marker of Murine Prostate Stem/Progenitor Cells., Stem Cells 27, 2220-8, 2009
小鼠	小鼠, 6-8 周	Prostate epithelial/stem	Trypsin: 0.05%	HBSS
小鼠	小鼠, 2 周	Prostatic epithelial	Collagenase Type 3: 170 u/ml	DMEM	Imamov Otabek, Morani Andrea, Shim Gil-Jin, Omoto Yoko, Thulin-Andersson Christina, Warner Margaret, Gustafsson Jan-Ake: Estrogen receptor beta regulates epithelial cellular differentiation in the mouse ventral prostate, Proc Natl Acad Sci U S A 101, 9375-80, 2004
小鼠	小鼠, 雄性	Prostatic stem	Collagenase Type 1: 170 u/ml	DMEM	Dubey P, Wu H, Reiter RE, Witte ON: Alternative pathways to prostate carcinoma activate prostate stem cell antigen expression, Cancer Res 61, 3256-61, 2001

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