CompTech EA 說明書

發布時間：2018/7/4

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上海起發為complementtech一級經銷商，Complement Technology，Inc.于2005年成立.CompTech于2005年收購Advanced Research Technologies。Complement Technology繼續為世界各地的科學家提供高質量的試劑，并在我們的清單中增加了許多新試劑。我們盡力為您的應用提供宜試劑和使用我們補充試劑的適建議。

CompTech EA 說明書

名稱： EA（抗體致敏綿羊紅細胞）

EA (antibody-sensitized sheep erythrocytes)

目錄號： B200 和B201 和B202

可用尺寸： 5 mL ， 10 mL和20 mL

濃度： 5×10 ^8個細胞/ mL

吸光度： 甲_412nm處 = 0.87以1/50稀釋在去離子水中

形式： 液體 - 不要凍結

活性： 補體CH50檢測功能齊全

緩沖區： GVB ⁺⁺ （CompTech＃B100和B102）

防腐劑： GVB ⁺⁺含有0.025％sodium azide作為殺菌劑

儲存： + 4 ^o C 避免冷凍。冷凍裂解細胞。

資源： 正常來自美國農業部注冊設施的羊血。

產地： 制造于美國。

一般描述

涂有兔抗羊紅細胞抗血清（溶血素）的綿羊紅細胞傳統上用于測定血清樣品中補體經典途徑的活性。這些測定產生血清的CH50滴度（Morgan，BP（2000）; Dodds，AW和Sim，RB（1997））。

在CH50測定（GVB ⁺⁺）中使用的傳統緩沖液中以測定準備濃度提供EA 。他們每周一早上準備新鮮，需要在周五之前訂購，以便在下周接收。它們在周一下午由隔夜快遞運送到周二（或大多數貨運的周三）。它們通常可在制備后使用2周。他們被運往冷，但并不在室溫下長時間傷害（請注意，循環60-90天，37 ^Ø ç 體內）。它們應該一次每次使用前（在500 3分鐘，4?1000×g下進行洗滌^ö C）和再懸浮在GVB ⁺⁺中的原始濃度以減少背景。該程序也可用于濃縮細胞。這可以通過減少用于重懸細胞的體積來實現。

物理特征

由于以下原因，EA由IgM抗體制成。 IgM在激活經典途徑方面比IgG高約100倍，因為C1q必須與抗體上的至少兩個Fc結構域結合以進行激活。因此，在敏感的測定中，已經估計每個EA少至10個IgM可以引起裂解，而IgG裂解每個EA需要大約1000個IgG（Ross，GD（1986））。這主要是因為在IgM中，在每個分子上的固定位置上存在五個緊密間隔的Fc結構域。因為表面上IgG分子的間隔更隨機，所以在細胞表面上的正確位置發現2至5個IgG分子以結合并激活C1的可能性較小。

測定

盡管CH50滴度被廣泛使用并且作為補體活性的主要臨床試驗，但CH50測定程序尚未*標準化。在研究實驗室中，有與實驗室一樣多的程序，但所有程序基本相似并且給出有用的結果。可根據要求從CompTech獲得詳細的逐步典型CH50滴定方法。簡而言之，稀釋含有補體的血清樣品，使得測定中的終稀釋度為1/100至1/500。對照包括兩個沒有0％裂解背景補體的試管和兩個試管，其中用水代替緩沖液進行100％裂解對照。在濕冰上應設置分析管。用GVB ⁺使體積達到1.3mL⁺（或水），將管混合并加入0.2mL 5×10⁸EA / mL的細胞并混合。的反應，應溫育在37 60分鐘^ö ℃水浴含有大約10周分鐘的間隔再混合。 1小時后，將剩余的細胞離心（500-1000×g，3分鐘），并在1cm比色皿中在541nm處測定上清液的吸光度。有多種數學方法可用于繪制結果圖。通過在對數 - 對數圖上繪制x軸上的每個測定中使用的微升血清和y軸上的y /（ 1-y），可以獲得幾乎的直線。術語“y”是指裂解的細胞的比例，在0％裂解時為0，在30％裂解時為0.3，在50％裂解時為0.5，等等。補體樣品的CH50值從該線在y軸上穿過1.0（50％裂解）獲得，并計算如下：CH50 = 1000除以血清的體積（以μL計），得到50％裂解。例如，如果用5.6μL血清達到50％裂解，則CH 50 = 179單位/ mL。應該注意的是，可以在應該是相同的樣品上獲得不同的CH 50值。這是 CH50測定中涉及的大量變量的結果，包括在春季收獲的綿羊紅細胞比在秋季抽取的血液中的細胞更容易溶解，沒有兩個溶血素抗體很多是相同的，因為它們是由兔子等產生的抗血清制成的。

應用

EA可用于確定血清的CH50溶血滴度，即CH50（參見上文的測定）。它們可用于使用耗盡的血清滴定單個補體成分的功能活性。它們也可用于制備攜帶活化的補體中間體的細胞（Morgan，BP（2000）; Dodds，AW和Sim，RB（1997））。將EA與C1溫育以制備（EAC1）或C1和C4（EAC14）。可以將EAC14細胞與C2一起溫育以制備攜帶經典途徑C3轉化酶的EAC142細胞，并且可以將EAC142與C3一起溫育以制備攜帶C5轉化酶的EAC1423細胞。每種中間體可用于測定流體相組分的功能補體活性。例如，EAC142細胞的裂解對低C3濃度極其敏感，并且即使在諸如血清的復雜混合物中，這也可用于滴定C3補體活性。

規

綿羊紅細胞（Es）用于人補體測定，部分是為了方便，但也因為它們缺乏人補體的膜結合調節劑。對于人補體，在Es上不存在顯著水平的功能性DAF，CD59或CR1。因此，Es對于它們缺乏膜調節活性是有用的。

參考

摩根，BP編輯。（2000）補充方法和協議。 Humana新聞。

Dodds，AW和Sim，RB編輯（1997年）。補充實用方法（ISBN 019963539）牛津大學按，牛津。

Ross，GD（1986）補體系統的免疫生物學。（ISBN 0-12-5976402）奧蘭多學術出版社。

僅供研究使用。

不適合人類或藥物使用。

complementtech產品目錄：

貨號	品名	規格	目錄價	品牌
A098	C1	200µg	3400	complementtech
A099	C1q	1000µg	3162	complementtech
A100	C1q (40% Glycerol)	1000µg	3162	complementtech
A102	C1r Enzyme	250µg	3417	complementtech
A103	C1s Proenzyme	250µg	3366	complementtech
A104	C1s Enzyme	250µg	3281	complementtech
A140	C1 Esterase Inhibitor	1000µg	3468	complementtech
A112	C2	50µg	3298	complementtech
A113	C3	250µg	2482	complementtech
A113c	C3 (concentrated)	1000µg	7327	complementtech
A118	C3a	50µg	3162	complementtech
A119	C3a desArg	50µg	3043	complementtech
A114	C3b	250µg	3094	complementtech
A115	iC3b	250µg	3417	complementtech
A116	C3c	250µg	3706	complementtech
A117	C3d	100µg	3825	complementtech
A105	C4	250µg	3468	complementtech
A105c	C4 (concentrated)	1000µg	8245	complementtech
A106	C4a	50µg	4114	complementtech
A107	C4a desArg	50µg	4114	complementtech
A108	C4b	250µg	2992	complementtech
A109	C4b Binding Protein	250µg	4131	complementtech
A120	C5	250µg	3570	complementtech
A144	C	30µg	6188	complementtech
A144(300)	C	300µg	詢價	complementtech
A145	C desArg	50µg	4301	complementtech
A122	C5b,6	50µg	3468	complementtech
A123	C6	250µg	3366	complementtech
A124	C7	250µg	3366	complementtech
A125	C8	250µg	3536	complementtech
A126	C9	250µg	3366	complementtech
A127	SC5b-9 Complex	100µg	2992	complementtech
A135	Factor B	250µg	3213	complementtech
A136	Factor D	25µg	3417	complementtech
A137	Factor H	250µg	2958	complementtech
A137c	Factor H (conc.)	10000µg	詢價	complementtech
A138	Factor I	100µg	3366	complementtech
A139	Factor P	100µg	3468	complementtech
A150	Cobra Venom Factor (USA ONLY)	1000µg	3298	complementtech
A154	Factor Ba	100µg	3298	complementtech
A155	Factor Bb	250µg	6188	complementtech
A118	C3a	50µg	3162	complementtech
A119	C3a desArg	50µg	3043	complementtech
A106	C4a	50µg	4114	complementtech
A107	C4a desArg	50µg	4114	complementtech
A144	C	30µg	6188	complementtech
A144(300)	C	300µg	詢價	complementtech
A145	C desArg	50µg	4301	complementtech
A300	C1q-Dpl	1ml	2074	complementtech
A312	C2-Dpl	1ml	2074	complementtech
A314	C3-Dpl	1ml	2482	complementtech
A305	C4-Deficient Guinea Pig	1ml	2448	complementtech
A308	C4-Dpl	1ml	2482	complementtech
A320	C5-Dpl	1ml	2125	complementtech
A323	C6-Dpl	1ml	2040	complementtech
A324	C7-Dpl	1ml	2074	complementtech
A325	C8-Dpl	1ml	2074	complementtech
A326	C9-Dpl	1ml	2074	complementtech
A335	Factor B-Dpl	1ml	2074	complementtech
A336	Factor D-Dpl	1ml	2074	complementtech
A337	Factor H-Dpl	1ml	2686	complementtech
A338	Factor I-Dpl	1ml	2482	complementtech
A339	Factor P-Dpl	1ml	2482	complementtech
A340	C3/C4 Inactivated Serum	1ml	2074	complementtech
A399	C1q/Factor D-Dpl	1ml	2856	complementtech
A200	Goat Anti-Human C1q	1ml	1054	complementtech
A212	Goat Anti-Human C2	1ml	2329	complementtech
A213	Goat Anti-Human C3	1ml	1054	complementtech
A218	Rabbit Anti-Human C3a	1ml	2550	complementtech
A205	Goat Anti-Human C4	1ml	1054	complementtech
A206	Rabbit Anti-Human C4a	1ml	2550	complementtech
A220	Goat Anti-Human C5	1ml	1275	complementtech
A221	Rabbit Anti-Human rC	1ml	2550	complementtech
A223	Goat Anti-Human C6	1ml	1275	complementtech
A224	Goat Anti-Human C7	1ml	1275	complementtech
A225	Goat Anti-Human C8	1ml	1275	complementtech
A226	Goat Anti-Human C9	1ml	1275	complementtech
A227	Rabbit Anti-Human SC5b-9 Neo (lgG)	0.2ml	2584	complementtech
A235	Goat Anti-Human Factor B	1ml	1275	complementtech
A236	Goat Anti-Human Factor D	1ml	2499	complementtech
A237	Goat Anti-Human Factor H	1ml	1275	complementtech
A238	Goat Anti-Human Factor I	1ml	1309	complementtech
A239	Goat Anti-Human Factor P	1ml	1462	complementtech
A240	Goat Anti-Human C1-INH	1ml	1173	complementtech
A260	Rabbit Anti-Human Vitronectin	1ml	1445	complementtech
NHS	Human Serum	1ml	578	complementtech
GPS	Guinea Pig Serum	1ml	714	complementtech
NRS	Rat Serum	1ml	901	complementtech
NMS	Mouse Serum	1ml	1309	complementtech
B102	GVB++ (with Ca and Mg)	250ml	1224	complementtech
B100	GVB++ (with Ca and Mg)	1 Liter	3264	complementtech
B103	GVB° (without Ca and Mg)	250ml	1224	complementtech
B101	GVB° (without Ca and Mg)	1 Liter	3264	complementtech
B104	GVBE (with EDTA)	250ml	1224	complementtech
B105	GVBE (with EDTA)	1 Liter	3264	complementtech
B110	SGVB++(low ionic strength w/Sucrose)	250ml	1870	complementtech
B111	SGVB++(low ionic strength w/Sucrose)	1 Liter	5066	complementtech
B112	VBS++ (with Ca and Mg)	250ml	1224	complementtech
B113	VBS++ (with Ca and Mg)	1 Liter	3264	complementtech
B200	EA (Ab-sensitized sheep E)	5ml @ 5x10⁸/ml	3043	complementtech
B201	EA (Ab-sensitized sheep E)	10ml @ 5x10⁸/ml	4556	complementtech
B202	EA (Ab-sensitized sheep E)	20ml @ 5x10⁸/ml	6324	complementtech
B210	Es (sheep E)	20ml @ 5x10⁸/ml	2652	complementtech
B300	Er (rabbit E)	5ml @ 5x10⁸/ml	1649	complementtech
B301	Er (rabbit E)	10ml @ 5x10⁸/ml	2652	complementtech
B302	Er (rabbit E)	20ml @ 5x10⁸/ml	3893	complementtech
B400	Zymosan (preactivated)	10ml @ 1x10⁹/ml	2261	complementtech
B106	MgEGTA	10ml @ 0.1M	1139	complementtech
B250	MCAR	1.0 ml	2482	complementtech
Hemolysin	Hemolysin NEW	2.0 ml	2040	complementtech

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