ALSTEM是一家位于灣區(qū)的早期生物技術(shù)公司，擁有快速擴展的產(chǎn)品和服務組合，為生物制藥和學術(shù)機構(gòu)提供服務。受到加利福尼亞干細胞研究承諾的啟發(fā)，ALSTEM于2012年由具有iPS細胞重編程和基因組編輯技術(shù)專業(yè)知識的科學家創(chuàng)立。

hTERT Cell Immortalization Kit: #CILV02

hTERT細胞永生化試劑盒：＃CILV02

描述

*，原代細胞僅在培養(yǎng)中經(jīng)歷預定的和有限數(shù)量的細胞分裂。在有限的群體倍增（其數(shù)量因物種，細胞類型和培養(yǎng)條件而異）之后，原代細胞進入一種狀態(tài)，即所謂的復制衰老，它們不再分裂。為了超越衰老，存在幾種使培養(yǎng)中的哺乳動物細胞永生化的方法。近發(fā)現(xiàn)的細胞永生化方法是通過端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶蛋白（TERT）的表達。它對受端粒長度影響大的細胞特別有用，包??括許多人類細胞類型。這種蛋白質(zhì)通常在大多數(shù)體細胞中沉默。當外源引入hTERT時，這些細胞能夠通過維持足夠的端粒長度來避免復制性衰老。

• 概觀

用含有hTERT的重組慢病毒感染細胞，用嘌呤霉素篩選產(chǎn)生自己的永生化細胞

• 程序

1. 將靶細胞以1-2×10 ^5個細胞/孔的密度鋪在6孔板的一個孔中。
2. 第二天，將濃縮的重組慢病毒在37℃水浴中解凍，并在解凍時立即將其從浴中取出。
3. 在4μlTransPlus試劑（ALSTEM，目錄號V050）存在下，用4-20μl/孔上清液感染6孔板中的靶細胞。
   注意：TransPlus試劑是一種聚陽離子，可中和電荷相互作用，從而增加假病毒衣殼與細胞膜之間的結(jié)合。
4. 第二天，去除病毒上清液并將適當?shù)?生長培養(yǎng)基加入細胞中并在37℃下孵育。
5. 孵育72小時后，將細胞繼代培養(yǎng)到2×100mm培養(yǎng)皿中并加入適量的嘌呤霉素以穩(wěn)定細胞系產(chǎn)生。
6. 選擇后10-15天，挑選克隆進行擴增，篩選陽性克隆。
   注意：解凍后，我們建議不要將上清液再次冷凍以備將來使用，因為病毒滴度會顯著下降

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