ALSTEM VP100說明書

ALSTEM是一家位于灣區的早期生物技術公司，擁有快速擴展的產品和服務組合，為生物制藥和學術機構提供服務。受到加利福尼亞干細胞研究承諾的啟發，ALSTEM于2012年由具有iPS細胞重編程和基因組編輯技術專業知識的科學家創立。

Lentiviral Packaging Mix: #VP100

慢病毒包裝混合物：＃VP100

描述

慢病毒包裝混合物是一種即用型第三代基于HIV的慢病毒包裝系統，其中質粒表達慢病毒生產所需的元件。為了生產高質量的慢病毒顆粒，所需要的只是含有您感興趣基因的慢病毒表達載體。慢病毒包裝混合物含有必需的包裝載體，其含有病毒結構蛋白和包膜載體以表達水泡性口炎病毒糖蛋白（VSVG）。慢病毒包裝混合物是TAT獨立的，因為它僅支持具有嵌合5'LTR的慢病毒表達載體，其中HIV啟動子被CMV或RSV替代。

• 概觀

慢病毒包裝混合物是第三代包裝質粒的優化配方，提供輔助功能以及產生高滴度慢病毒所需的反式結構和復制蛋白。

1.將含有慢病毒顆粒的培養基從平板轉移到無菌容器中，并以300×g離心培養基10分鐘以除去細胞碎片。

2.通過0.45μm過濾器過濾上清液。

3.將過濾的上清液轉移到無菌容器中，并向每4體積的含有慢病毒的上清液中加入1體積的冷的慢病毒沉淀溶液（4℃）。（實施例：5ml慢病毒沉淀溶液，含20ml病毒上清液）。

4.充分混合并冷藏3小時至過夜。與Lentivirus沉淀溶液混合的含有慢病毒的上清液在4°C下可穩定長達4天。

5.在4℃下以1500×g離心混合物30分鐘。離心后，慢病毒顆粒可在容器底部顯示為米色或白色顆粒。

6.丟棄上清液。通過以1500×g離心5分鐘來旋轉殘留溶液。通過抽吸去除所有的液體痕跡，小心不要打擾顆粒中沉淀的慢病毒顆粒。

7.使用冷的無菌PBS或DMEM在4℃下以1/10至1/100的原始體積重懸慢病毒顆粒。

8.在低溫小瓶中分裝并儲存在-80°C直至準備使用。

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