ALSTEM是一家位于灣區的早期生物技術公司，擁有快速擴展的產品和服務組合，為生物制藥和學術機構提供服務。受到加利福尼亞干細胞研究承諾的啟發，ALSTEM于2012年由具有iPS細胞重編程和基因組編輯技術專業知識的科學家創立。

NanoFect轉染試劑：＃NF100

產品描述

NanoFect Transfection Reagent是一種*的聚合物混合物，與的脂質轉染試劑盒相比，可以更低的成本向細胞提供更多的DNA和siRNA。NanoFect™是一種功能強大，適用范圍廣泛的轉染試劑，可有效，可重復轉染。

• 概觀
• 程序

NanoFect試劑在DNA和RNA存在下自組裝納米顆粒。這些復合物很容易被靶細胞吸收，從而有效地進行基因遞送。由于NanoFect在抗生素和血清存在下起作用，因此無需更換培養基。這種易于使用的方案，在直接添加到靶細胞之前快速一步孵育15分鐘，使NanoFect非常適合高通量轉染實驗。

為了高轉染效率和低毒性，以高密度轉染細胞。建議使用50-80％的融合度。

細胞應在轉染前18至24小時接種，以使細胞密度在轉染時達到50~80％匯合。在轉染前2小時，向每個孔中新鮮加入含有血清和抗生素的*培養基。

以下方案用于在24孔板中轉染，參見表1用于其他培養形式的轉染。

1.對于每個孔，在轉染前2小時新鮮加入0.5ml正常生長培養基（抗生素不影響結果）。

2.對于每個孔，在50μl不含血清的DMEM中稀釋0.5μgDNA，并輕輕混合。

3.將1μlNanoFect試劑加入另一個含有50μl不含血清的DMEM的試管中，輕輕混勻。

4.將NanoFect / DMEM添加到DNA / DMEM溶液中。通過渦旋混合5-10秒。

5.在室溫下孵育約15分鐘，以使NanoFect / DNA復合物自組裝。

6.將100μlNanoFect/ DNA混合物逐滴添加到每個孔中的細胞中，并通過輕輕旋轉平板使其均質化。

7.將平板放回細胞培養箱中。

8.轉染后24至48小時檢查轉染效率。

表1.不同文化的推薦量

注意：對于不同的細胞類型，NanoFect（μL）：DNA（μg）的適合比例約為3：1。我們建議將NanoFect（μL）：DNA（μg）比例為2：1作為起點，通常可以提供令人滿意的轉染效率和不可見的細胞毒性，但NanoFect的量可以從2到4μl/μgDNA調整，具體取決于要轉染的細胞系。為確保NanoFect / DNA復合物顆粒的宜尺寸，我們建議使用含有高葡萄糖的無血清DMEM稀釋DNA和NanoFect Reagent。

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