QUANSYSBIO 355149HU說明書

引言

Q-Plex Human Micronutrient v2 (7-Plex)

Q-Plex™ 人體微量營養素（7-復合物）臨界反饋

微量營養素缺乏（MND）會對個人及其后代產生系統性和持久的影響（1）。MND影響全球人口，但對中低收入國家（LMIC）育齡兒童和婦女的影響不成比例。如果不進行治療，MND會顯著降低生活質量并造成致命后果。需要制定公共健康監測計劃，以確定面臨風險的人群，并確定要采取的適當干預措施。然而，已經表明，此類項目的可持續性取決于成本、能力發展和機構基礎的位置（2）。

一些組織試圖提供綜合平臺，以滿足公共健康監測項目的需求。通常，只有在地區或國家以外的測試中心才能使用具有良好特征的方法。這里需要注意的一個重要群體是VitMin實驗室（德國Willst?tt），該實驗室通常被認為是通過傳統的夾心ELISA方法測量微量營養素的金標準（3）。然而，這種偏好造成了對服務的高需求，并在不同情況下對研究人員造成了與出口相關的障礙（4）。因此，需要一種價格合理、準確且易于實施和使用的分析方法，以滿足LMICs公共健康監測項目的需要。

多重微量營養素評估工具（MMAT）最初于2014年推出，是PATH（美國華盛頓州西雅圖）和Quansys Biosciences（美國猶他州洛根）合作開發的一種多重ELISA。MMAT在正式發布后更名為Q-Plex人體微量營養素（5-Plex）。該分析同時評估了5種分析物的水平，包括鐵蛋白、C反應蛋白（CRP）、α-1-酸性糖蛋白（AGP）、可溶性轉鐵蛋白受體（sTfR）和視黃醇結合蛋白4（RBP4）（5）。與傳統ELISA相比，多重ELISA允許從小血樣中生成和收集更多數據。此外，與其他多重ELISA平臺不同，如Luminex和MagPix平臺依賴于可能需要專門設施、培訓和服務的流體系統，Q-Plex試劑盒是根據傳統ELISA協議設計和遵循的，只需要相對較少的培訓和專門設備。2017年，分析物小組擴大到包括甲狀腺球蛋白（Tg）和組氨酸豐富蛋白II（HRP2），并更名為Q-Plex人類微量營養素（7-Plex）。這拓寬了分析的能力，使其能夠指示碘的狀態以及患者目前或最近是否感染了惡性瘧原蟲瘧疾（6,7）。此外，確定使用干血點（DBS）作為樣本類型適用于除鐵蛋白外的所有分析物，鐵蛋白在DBS中反映了血清鐵蛋白與溶解紅細胞的細胞內鐵蛋白的混合物，混淆了測試結果（8）。

Quansys Biosciences和PATH以外的實驗室對Q-Plex人體微量營養素（7-Plex）分析進行了廣泛測試，以在現場廣泛部署之前驗證其性能。外部測試表明許多分析物具有良好的相關性，但確定了與更成熟的方法有關的數據相關性問題。一項研究表明，從Q-Plex人體微量營養素（7-Plex）和維生素產生的數據之間存在差異

尤其是sTfR、AGP、RBP4之間的差異，以及鐵蛋白分析的敏感性（4）。CDC完成的第二項研究將Quansys ferritin、sTfR、CRP和AGP與羅氏臨床分析儀的ferritin、sTfR、CRP和AGP進行了比較，并使用視黃醇HPLC參考標準對其中一些結果進行了支持，強調了sTfR和RBP4的可變性（9）。

CDC正在進行外部質量保證工作，以提高錳分析的標準化，為驗證外部發現提供了一個支持平臺。從CDC方法性能認證計劃中獲得40份樣本，由羅氏臨床分析儀對CRP、sTfR、鐵蛋白、AGP和視黃醇HPLC進行10次單獨運行，一式兩份。在Q-Plex人體微量營養素（7-Plex）上生成的這些樣品的數據與CDC的鐵蛋白和CRP參考值（圖1-2）很好地一致，但分析結果顯示一致性較差

對于AGP、sTfR和RBP4，與先前研究的結果相關（圖3-5）。此處未顯示甲狀腺球蛋白的數據，因為CDC參考樣品尚未對該分析物進行表征。

綜上所述，這些數據和第三方評估提供的反饋明確強調了需要改進的領域，以便MMAT分析成為現有方法的可行替代方法。簡而言之，要點如下：

•鐵蛋白分析的敏感性

•RBP4分析的精度

•sTfR和AGP數據與既定方法的相關性

Q-叢™ 人體微量營養素（7倍）數據

為了解決需要改進的領域，Quansys改進了工具，以生成Q-Plex人體微量營養素v2（7-Plex）。具體而言，新的捕獲抗體提高了鐵蛋白分析的靈敏度，同時仍保持與參考樣品的相關性（圖1）。這改變了分析范圍，以確保樣品分布更一致地落在可量化范圍的中間，從而對鐵蛋白含量較低的樣品進行更精確的測量。（圖6A）。

觀察到的RBP4缺乏精確度被確定為與RBP4樣本值低于或高于分析定量上限有關。為了應對這一挑戰，對分析進行了重新校準，以確保所有內源性樣本，而不僅僅是來自缺乏維生sA的個體的樣本，都落入標準曲線的線性部分，其中定量更精確（圖6B）。這是由于鐵蛋白分析的靈敏度提高，使樣品的工作稀釋度從1:10增加到1:40。此外，使用CDC的血清微量營養素性能驗證項目樣本進行的測試數據顯示，RBP4和視黃醇水平之間存在很強的相關性（R2=0.75）（圖5）。

在RBP4和鐵蛋白的1:40樣品稀釋法下，AGP、CRP、Tg、HRP2和sTfR均再次優化。

CRP和Tg的性能特征沒有隨新的樣品稀釋因子發生顯著變化（圖2），然而，AGP結果表明，優化改進了與參考值的相關性，同時也使數據點偏離了量化限制（圖6C-D）。為了改進sTfR分析，確定了新的捕獲和檢測抗體集，并用于改善與CDC參考值的相關性（圖4）。

改進微量營養素測定的最后一步是消除技術障礙，在使用相同的試劑盒和材料處理樣品時，這可能會導致實驗室之間的差異。在整個方案的培養步驟中，無需搖床即可優化分析。這不僅減輕了設備要求的負擔，而且消除了因以可變速度運行的平板振動篩之間的差異而產生的任何變化。此外，Quansys還提供了對照樣品，以確保分析性能。

總之，新優化的Q-Plex人體微量營養素v2（7-Plex）分析通過以下方式處理反饋：

•提高鐵蛋白分析的靈敏度

•提高RBP4分析的精確度

•改進sTfR和AGP數據與既定方法的相關性

•不再需要平板振動篩