一、基礎信息
1. 核心產品參數
- 貨號:AS-AB18A-100(100μl)、AS-AB18A-300(300μl)
-英文名:Anti-Npas4 Recombinant Rabbit Monoclonal Antibody
-中文名:重組抗Npas4兔單克隆抗體
- 品牌:Activity Signaling
- 宿主與類型:重組兔單克隆抗體,通過基因工程技術構建,避免動物個體差異
- 形態與保存:液體形式,1mg/ml濃度溶于PBS,短期4℃保存,長期-20℃分裝凍存
2. 靶標蛋白Npas4的生物學意義
Npas4(Neuronal PAS Domain Protein 4)屬于bHLH-PAS轉錄因子家族,是神經元活動依賴性的即早基因(IEG)產物。其表達具有高度神經元特異性,僅在突觸活動激活后數分鐘內迅速上調,且持續時間短暫(約1-2小時),被認為神經元活性的黃金標志物。Npas4的核心功能包括:
- 調控突觸可塑性:通過激活BDNF等下游基因,平衡興奮性與抑制性突觸(E/I平衡),參與學習記憶和恐懼消退。
- DNA損傷修復:與NuA4復合物結合,在神經元活動誘導的DNA斷裂位點募集修復蛋白,維持基因組穩定性,延緩神經退行性變。
- 晝夜節律調節:與BMAL1等時鐘基因互作,調控視交叉上核(SCN)對光信號的響應。
- 疾病關聯:其異常表達與精神分裂癥、自閉癥、癲癇及阿爾茨海默病等密切相關。
二、作用原理
1. 抗體設計與制備
該抗體通過重組DNA技術構建,具體流程包括:
- 抗原篩選:以Npas4蛋白C端保守區域(人源氨基酸597-802)為免疫原,確保跨物種識別(小鼠、大鼠、人類)。
- 單B細胞克隆:從免疫兔外周血分離特異性B細胞,測序獲取抗體可變區基因。
- 哺乳動物細胞表達:將抗體基因導入HEK293細胞,通過無血清懸浮培養大規模生產,避免動物源污染。
- 嚴格純化:經Protein A親和層析和SEC分子篩純化,純度>95%,內毒素水平<0.1EU/μg。
2. 作用機制
抗體通過雙價Fab片段特異性結合Npas4蛋白的PAS結構域,阻斷其與ARNT等伴侶蛋白的相互作用,從而抑制轉錄活性。該結合具有高度選擇性:
- 種屬交叉反應性:通過小鼠、大鼠及人類腦組織樣本驗證,在WB中均顯示單一87kDa條帶。
- 亞細胞定位:免疫熒光(IF)實驗證實其與DAPI共定位,提示抗體可穿透細胞核膜,識別內源性Npas4。
- 功能驗證:在Npas4基因敲除(KO)小鼠中無信號,證明抗體無交叉反應。
三、實驗痛點解決方案
1. 傳統抗體的局限性
- 特異性不足:多克隆抗體因識別多個表位,易與PAS家族其他成員(如NPAS1、NPAS3)交叉反應,導致WB背景高或IHC假陽性。
- 批次間差異:雜交瘤技術生產的小鼠單抗可能因細胞株遺傳漂變,導致不同批次效價波動。
- 驗證困難:缺乏KO模型驗證的抗體難以排除非特異性結合,影響實驗結論可信度。
2. 本產品的針對性優化
- KO驗證黃金標準:在Npas4 KO小鼠腦裂解液中無信號,排除與其他bHLH-PAS蛋白的交叉反應。
- 多應用場景適配:支持WB(1:500-1:2000)、IHC(1:100-1:500)、ICC/IF(1:200-1:1000),滿足從分子到組織水平的檢測需求。
- 即用型設計:1mg/ml高濃度溶液可直接使用,避免反復凍融導致的抗體降解。
- 兼容性擴展:可與cFos、Arc等其他IEG抗體聯用,實現多標記神經元活動分析。
四、核心優勢
1. 特異性與靈敏度的雙重提升
- 高親和力結合:通過表面等離子共振(SPR)測定,抗體與Npas4的KD值達10?? M級,可檢測低至0.1ng的重組蛋白。
- 背景信號抑制:在IHC實驗中,對小鼠睪丸等非表達組織無染色,證明其嚴格的組織特異性。
2. 批次穩定性與生產可靠性
- 基因層面一致性:重組抗體的DNA序列恒定,避免雜交瘤細胞突變導致的批次差異。
- 規模化生產能力:哺乳動物細胞培養系統可實現快速擴產,供貨周期短至2周。
3. 實驗效率優化
- 省時省力:無需預實驗優化稀釋度,推薦起始濃度直接適用于大多數實驗條件。
- 兼容多種檢測平臺:與HRP、Alexa Fluor等標記二抗配合,支持化學發光、熒光顯微鏡及流式細胞術。
4. 應用領域擴展
- 神經科學研究:用于神經元活動圖譜繪制、突觸可塑性機制解析及神經退行性疾病模型驗證。
- 藥物研發:作為靶點驗證工具,評估候選化合物對Npas4通路的調控作用。
- 高級成像技術:與組織透明化試劑盒(如CLARITY)聯用,實現全腦3D成像。
五、客戶群體與典型應用案例
1. 核心用戶
- 神經科學實驗室:研究突觸可塑性、學習記憶及神經退行性疾病的機制。
- 精神疾病研究機構:探索Npas4在自閉癥、抑郁癥等中的分子病理。
- 藥物研發企業:開發靶向Npas4通路的小分子抑制劑或基因療法。
- 細胞生物學實驗室:研究神經元活動誘導的基因表達動態變化。
2. 代表性實驗方案
- WB檢測神經元激活:
- 樣本:小鼠海馬組織裂解液(35μg蛋白/泳道)。
- 條件:抗體稀釋1:1000,4℃孵育過夜,HRP標記二抗1:5000,ECL顯影曝光30秒。
- 結果:在野生型小鼠中顯示清晰87kDa條帶,KO小鼠無信號。
- IHC定位Npas4表達:
- 樣本:大鼠腦冠狀切片(4%多聚甲醛固定)。
- 條件:抗體稀釋1:200,37℃孵育2小時,DAB顯色后蘇木精復染。
- 結果:特異性染色集中于海馬CA1區神經元細胞核,背景極低。
- IF檢測原代神經元激活:
- 樣本:體外培養的小鼠皮層神經元(經KCl刺激30分鐘)。
- 條件:抗體稀釋1:500,與MAP2抗體共染,Alexa Fluor 488標記二抗,激光共聚焦顯微鏡觀察。
- 結果:Npas4信號與MAP2陽性神經元共定位,且刺激組熒光強度顯著高于對照組。
六、訂貨信息與技術支持
1. 產品規格與價格
- 100μl裝:AS-AB18A-100
- 300μl裝:AS-AB18A-300
- 定制服務:提供HRP、Biotin等標記偶聯抗體,及大包裝批量采購優惠。
2. 訂購流程
-供應商:上海起發
七、總結
Anti-Npas4重組兔單克隆抗體(AS-AB18A系列)憑借重組技術的精準性、嚴格的KO驗證及多場景兼容性,成為神經科學研究的工具。其高特異性、批次穩定性及實驗效率,不僅解決了傳統抗體的痛點,更助力研究者在神經元活動機制、神經退行性疾病及藥物研發領域取得突破性進展。選擇該抗體,即選擇了可靠、高效、前沿的實驗解決方案。
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